影片讲述了新生代蜘蛛侠迈尔斯·莫拉莱斯(沙梅克·摩尔 Shameik Moore 配音)携手蜘蛛格温·斯泰西(海莉·斯坦菲尔德 Hailee Steinfeld 配音),穿越多元宇宙踏上更宏大的冒险征程的故事。面临每个蜘蛛侠都会失去至亲的宿命,迈尔斯誓言打破命运魔咒,找到属于自己的英雄之路。而这个决定和米格尔·奥哈拉(奥斯卡·伊萨克 Oscar Is aac 配音)所领军的蜘蛛联盟产生了极大冲突,一场以一敌百的蜘蛛侠大内战即将拉响!
有一个受聘于美国政府的机密组织,成员包括领军人物克莱(杰弗里·迪恩·摩根 Jeffrey Dean Morgan 饰)、玩世不恭的简森(克里斯·埃文斯 Chris Evans 饰)、武器专家罗克(伊德瑞斯·艾尔巴 Idris Elba 饰)以及普奇(哥伦布·绍特Columbus Short 饰)、酷格(奥斯卡·贾恩那达 Óscar Jaenada 饰)等人。他们在玻利维亚执行任务时,因内鬼麦克斯(杰森·帕特里克 Jason Patric 饰)的出卖,让每个人的生命都笼罩在死亡威胁里。克莱将计就计,伪造